این مطالعه در مؤسسه باغبانی، مرکز تحقیقات کشاورزی و جنگلداری لیتوانی طی سال‌های 2018 تا 2020 انجام شد. رقم سیب “Ligol” روی پایه P 60 کاشته شده به فاصله 4×1.25 متر در سال 1381 مورد مطالعه قرار گرفت.
جهت ردیف باغ از جنوب به شمال بود. درختان به عنوان دوک های باریک تربیت شده بودند. یک سیستم حفاظت گیاهی پایدار برای مدیریت باغات استفاده شد.
چهار موقعیت میوه در تاج پوشش آزمایش شد: (1) بالای درخت سیب (T)، (2) قسمت پایینی در داخل تاج پوشش (I) و (3-4) شرق (E) و غرب (W) طرف درختان سیب.
سیب زیر درختی امروز برای دو تیمار آخر در ارتفاع 1.2-1.8 متری از سطح زمین برداشت شد. آزمایش در شش تکرار با دو درخت سیب در هر کرت انجام شد. آزمایش در قالب طرح کاملا تصادفی انجام شد.
ده میوه در هر درخت سیب از موقعیت میوه آزمایش شده در تاج پوشش به طور تصادفی برای تجزیه و تحلیل انتخاب شدند. در مجموع 20 میوه در هر تکرار در زمان برداشت بهینه مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.
میوه‌ها جمع‌آوری و در معرض خشک کردن انجمادی قرار گرفتند. میوه های خشک شده آسیاب شده و پودر شده و در یک ظرف در بسته در یک مکان خشک تاریک نگهداری می شود.
مقدار 2.5 گرم (وزن دقیق) پودر سیب لیوفیلیزه در یک ویال شیشه ای تیره وزن شده و به 25 میلی لیتر اتانول 70 درصد (v/v) اسیدی شده با اسید هیدروکلریک 2 درصد اضافه شد.
فرآیند استخراج به مدت 20 دقیقه در 80 کیلوهرتز و 1130 وات، در حمام اولتراسونیک (Elmasonic P، Singen، آلمان) ادامه یافت. عصاره ها از طریق فیلترهای غشایی با اندازه منافذ 0.22 میکرومتر (Carl Roth GmbH، کارلسروهه، آلمان) فیلتر شدند.
مقدار 0.5 گرم پودر سیب لیوفیلیزه (وزن دقیق) وزن شد و به 50 میلی لیتر آب تصفیه شده اضافه شد. استخراج به مدت 10 دقیقه در حین تکان دادن انجام شد. عصاره از طریق فیلتر غشایی با اندازه منافذ 0.22 میکرومتر (Carl Roth GmbH، کارلسروهه، آلمان) فیلتر شد.
